(1) 計(jì)算每次注射所需抗原的量和體積。皮下注射或肌肉注射時(shí)，每只小鼠每次 5-I00ug 抗原 ，注射體積小于 20uL; 

腹腔內(nèi)注射時(shí)，每只小鼠每次注射體積為 200?500ul。

強(qiáng)洗滌劑會(huì)減弱乳化效應(yīng), 需避免。

準(zhǔn)備大約比最終所需量多50%的疫苗 。

(2) 根據(jù)所加材料的總體積選擇針筒。佐劑和抗原的總體積應(yīng)大約為針筒體積的一半 。

例如 ，準(zhǔn)備 2.5ml 的疫苗時(shí)，用 5ml 的針筒進(jìn)行乳化。

(3) 使用前 37℃預(yù)熱弗氏完全佐劑（或弗氏不完全佐劑），振蕩1-2 min或用手倒轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次，將結(jié)核分枝桿菌均勻重懸。

吸取所需體積的弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑到針筒內(nèi)，連接針筒到雙孔接頭，排出空氣 (過(guò)量空氣將妨礙穩(wěn)定的乳化劑的形成）。

(4) 吸取水溶性抗原到另一針筒，排出空氣（過(guò)量空氣可妨礙穩(wěn)定的乳化劑的形成）。

(5) 將有抗原的針筒連在雙孔接頭的一端。

確定兩個(gè)針筒均經(jīng) Luer-lock 安全地固定在雙孔乳化接頭上。

(6) 平穩(wěn)地推動(dòng)活塞，使所有的抗原溶液穿過(guò)雙孔接頭與弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑混合。

相互交替，持續(xù)使混合物從一個(gè)針筒轉(zhuǎn)到另一個(gè) 。

(7) 按上述步驟繼續(xù)乳化，直到穩(wěn)定的乳化劑形成。

這將需要數(shù)分鐘。推出一小滴乳化劑到盛有水的燒杯內(nèi)，小乳滴應(yīng)該在水面形成穩(wěn)定的油珠。

如果乳劑滴人水面分散，重新組裝針筒，繼續(xù)乳化。

(8) 將所有乳化劑推人一個(gè)針筒。拔去雙孔接頭，加上注射針頭。

另外可選擇將空針筒拔去，換上1ml 無(wú)菌針筒。

此時(shí)，乳化劑可轉(zhuǎn)入1ml 針筒以備注射。

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